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一，簡述

本試驗方法是基于當(dāng)實驗室離心機操作和試驗時，將吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈暴露在密集的細菌孢子懸浮液上來觀察是否有細菌孢子逸出。在按照制造商的說明書和按照處理危險生物材料相關(guān)的良好實驗室習(xí)慣進行操作時，設(shè)計本試驗在可能發(fā)生的預(yù)見事件期間，全面考驗密封圈的設(shè)計

二，執(zhí)行標準

GB 4793.7—2008附錄AA

IEC61010-2-020:2006

三，設(shè)備構(gòu)成

離心機（客戶自配）；

試驗箱：wan全密封功能，排風(fēng)功能，高效過濾功能；

熏蒸功能

四，技術(shù)參數(shù)

控制系統(tǒng)：PLC;

操作界面：彩色7寸威綸通，中英文切換；

試驗箱：2.8 m3/min 速率抽氣的排風(fēng)扇；

懸浮液：枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢（客戶自備）；

無菌瓊脂皿10只；

熏蒸劑客戶自備；

五，操作流程

試驗懸浮液

試驗生物體的孢子的水狀懸浮液即枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢(參見 B.atrophaeus Nakamura 或 B.globigii)含≥1×101° spores/mL。

5.1 試驗皿

裝有適合試驗生物體生長介質(zhì)的無菌瓊脂皿。通過從100 spore/mL～1000   spore/mL 的懸浮液

中取出0. 1 mL, 精度±30%,倒在兩塊瓊脂平板上，在這批瓊脂平板上應(yīng)該能夠培養(yǎng)試驗微生物的低 濃度。

5.2 取樣設(shè)備

對于所有的實驗室離心機，取樣設(shè)備包括為取樣表面準備的用無菌水弄濕的無菌棉簽。

5.3 熏蒸設(shè)備

每個單獨的試驗后，應(yīng)該對設(shè)備的試驗箱及其內(nèi)部進行適當(dāng)熏蒸，從而殺死試驗懸浮液殘留的孢 子。在試驗前通過確保轉(zhuǎn)頭或試驗箱沒有背景污染來驗證熏蒸的效果。應(yīng)該注意保證在試驗進行前熏 蒸劑充分揮發(fā)。試驗箱的通風(fēng)系統(tǒng)是關(guān)閉的，經(jīng)過與試驗時間相同的時間之后，測量熏蒸劑的濃度。如 果熏蒸劑的濃度可測得(在23℃甲醛>2.44 mg/m3 的情況下),則要推遲進行試驗，并繼續(xù)通風(fēng)，直到

濃度下降為止。

注：吸人熏蒸劑是有毒的，應(yīng)該注意避免人員暴露在蒸汽中，并且在蒸汽的后續(xù)處理中也應(yīng)避免人員暴露。

5.4樣品評價

在試驗皿表面培養(yǎng)所有的菌種。用棉簽擦拭試驗皿表面，將該試驗皿在37℃下進行18 h～24 h 的有氧細菌培養(yǎng)。通過橙黃色來辨認枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢菌落，以菌落形成的單位進行記錄。

5.5試驗規(guī)程

AA.5.1  試驗懸浮液的檢查

每次試驗之前，將試驗懸浮液的適當(dāng)稀釋物涂在試驗皿上，立即進行試驗。

AA.5.2  試驗方法

AA.5.2.1  試驗次數(shù)

對每個吊籃或轉(zhuǎn)頭進行三次獨立的試驗，每次獨立的試驗都要對吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈進行試驗。 試驗前要按照規(guī)定進行對照樣品的取樣。

AA.5.2.2   固定角度的轉(zhuǎn)頭試驗方法

將試驗懸浮液裝入受試轉(zhuǎn)頭的容器內(nèi)，不加蓋或不密封地放置在轉(zhuǎn)頭的每個位置。按照制造商的 使用說明書，將所有轉(zhuǎn)頭位置上的容器達到其額定容量。

用吸管把另外的試驗懸浮液小心滴入轉(zhuǎn)頭中間，以模擬一個“灑落"。如果可能，在沒有溢出轉(zhuǎn)頭的 情況下，“灑落"量應(yīng)該等于或大于上限為5 mL 的一個容器的容量，或者對于具有較大容量容器的轉(zhuǎn) 頭，灑落量應(yīng)該是5 mL 或一個容器容量的10%,取其較大者。如果使用量小于用來模擬“灑落"試驗 懸浮液的滿容量，則必須做記錄。

如果使用過濾器作為斜角式轉(zhuǎn)頭的主要防護模式，那么使用的吊籃密封試驗方法。

AA.5.2.3   吊籃密封方法

對于密封的吊籃和過濾器，需要一種不同的試驗方法。吊籃按其額定容量裝有試驗懸浮液。蓋上 蓋子以后，吊籃緩慢倒置兩次，以使試驗懸浮液落在吊籃封口內(nèi)側(cè)上。

注：由于吊籃和轉(zhuǎn)頭有多種設(shè)計，上述試驗方法也許不太適合所有的設(shè)計。在這些情況下可能需要開發(fā)其他方法 以達到同樣的效果，例如按照制造商的說明書考驗使用的密封圈。

AA.5.2.4  對照樣品

每次試驗之前進行表面取樣來測量試驗微生物的背景污染。首先，在O型密封圈內(nèi)側(cè)進行表面取 樣。在試驗懸浮液裝入吊籃或轉(zhuǎn)頭以后，在吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈的整個外側(cè)進行表面取樣，并在離心腔 內(nèi)側(cè)周邊的多個點進行表面取樣，其高度是實驗室離心機正在運行時的吊籃或轉(zhuǎn)頭密封圈的高度。當(dāng) 試驗一個密封的吊籃時，從轉(zhuǎn)頭的表面取樣。對于密封的吊籃或過濾器，在吊籃倒置以后，用棉簽對封 口進行附加的取樣。也可在有潛在污染的地方用棉簽取樣。

AA.5.2.5  離心

在取得對照樣品之后 加速到實驗室離心機受試旋轉(zhuǎn)組件的最大轉(zhuǎn)速，并在該轉(zhuǎn)速 保持5 min, 然后減速到停。

實驗室離心機停止后，打開機蓋，用棉簽從對照樣品的取樣部位取樣

AA.5.2.6  消毒

每次試驗之后，對試驗箱及其內(nèi)部通過熏蒸進行消毒，對試驗箱用排風(fēng)扇che底通風(fēng)。 對受試吊籃或轉(zhuǎn)頭按照制造商推薦的方法進行消毒。

5.6合格與不合格的標準

對每個轉(zhuǎn)頭或吊籃進行三次獨立的、有效的試驗。每次獨立的試驗都通過，才能算作合格，其中任 意一個單獨的有效試驗不通過都會導(dǎo)致整體不合格。

只有在下述兩種情況之一時試驗才有效，加入最大量的附加試驗懸浮液，或 者如果離心后立即從密封圈內(nèi)取出菌落形成單位>1×103 的樣本，在同一位置的該樣品的菌落形成單 位大于對照樣品。

對于三個單獨的試驗，離心作用后，通過擦拭回收的(在吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈內(nèi)的除外)菌落形成單 位的數(shù)量不得超出在試驗前收集的對照樣品中回收數(shù)量1個菌落形成單位(在數(shù)量非常低時，允許采樣 誤差)。如果在任何對照樣品中檢測到超過5個菌落形成單位的數(shù)量，那么該試驗是無效的，應(yīng)該重新 進行試驗。